为什么样品与标准品的保留时间相差2分钟
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《应用色谱技术问答》之液相色谱篇-作者-施超欧(恐龙)
在分析中药提取物时，为什么样品与标准品的保留时间相差2分钟？
在做中药提取液的色谱分析时，发现样品中被检物质与对照品的保留时间相差了很多，非常奇怪的现象是，我在样品进完样后，再进对照品发现峰的时间同样也向后推迟了1分钟左右（是跟第一针标准品的出峰时间比较），而且柱效下降了很多，(原来有13000，后面才3000多)，基线也有漂移的现象。我的流动相是缓冲盐溶液，我想pH引起的可能性不是很大吧？我是提取（水煎或醇提）后一过滤了事，是不是样品前处理有问题？
答：中药提取液成分复杂，不经过富集、纯化处理直接上HPLC分析，容易造成色谱柱污染，甚至只要进一针样品就能影响到下一针的分析。从现象来看，是很典型的样品污染柱子引起了保留时间的差异。出峰推迟估计是因为保留在柱上的杂质对被测物有吸附作用。还有一种可能是提取用乙醇，直接大体积进样会造成峰形变差、保留时间提前。
中药样品中目标化合物通常含量不高，但非目标成分复杂，需要较复杂的前处理，而复杂前处理会影响回收率，因而造成两难的情况。如果实在不能通过处理令样品纯化，分析时应增加每次进样间的时间间隔，让更多的污染物被洗脱；或者使用梯度洗脱，在正常分析后提高流动相的洗脱能力，冲洗杂质，然后再回到正常分析的流动相比例并平衡一段时间。另外，不影响分析的情况下，尽量减少进样量，这样也减少了色谱柱的污染物，可以减小保留时间的差异。
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