恐龙

有网友提到新买了一根Kromasil 100－5C18柱，刚开始用时效果较好，条件为30mM KH2PO4，pH=2.00，柱温30度。连续使用大约两天后，各标准品峰明显前移。有些原来能分开的峰，现在用同样的条件已经分不开了。最近我继续使用该柱，不同的是每天连续使用时间不超过12小时。使用后先用5%甲醇/水冲洗，再用100%甲醇冲洗。这样使用了三天，峰的保留时间不再前移。因此，我有二个问题：A 峰的前移是由于C18被水解的缘故吗？如不是，又是什么原因呢？B 对于使用低pH纯水系缓冲盐的C18柱，每天使用12小时，用5%甲醇/水洗净缓冲盐，再用甲醇冲洗，能延长C18柱的使用寿命吗？
使用Kromasil 100－5C18出现这种情况是不了解这种柱子的特性。关于上面的二个问题，作如下分析：
1.峰前移的原因是使用了纯水流动相的缘故。kromasil填料以高碳覆盖量而自豪，在纯水（或水比例大于95%）的环境下因为C18官能团非极性排斥，会使伸展状态的官能团在排斥力的作用下“倒伏”，同时也因极性力形成的张力使“水膜”在填料微孔口形成而覆盖微孔口，这两点都使分析物难以与C18官能团接触，保留时间因此提前。极端情况下，甚至丧失保留性质。不仅是C18，对于Kromasil的其他填料，都反对用纯水（或水比例大于95%）的流动相。
2.其后提到“最近我继续使用该柱，不同的是每天连续使用时间不超过12小时。使用后先用5%甲醇/水冲洗，再用100%甲醇冲洗。这样使用了三天，峰的保留时间不再前移。”，这正是采用了正确的方法。用甲醇或乙腈等纯溶剂冲洗较长时间，可以使“倒伏”的官能团回复其原有状态，之前用5%甲醇水溶液洗去盐再用纯甲醇是非常地道的做法！
3.一般不提倡你所提到的纯水使用环境。非要这样用，我也建议你用预柱，缩短这样的使用时间，及时冲洗，隔夜封存于纯有机溶剂都是很好的柱维护措施。另外可考虑是否可在流动相中添加5%的甲醇或乙腈，如不影响分离情况和峰形的话。

    其它类型的C18也有这种现象，只是没有Kromasil柱明显，为了克服纯水溶剂长时间运行产生“水性坍塌”对色谱柱分离造成的影响，现在有新型的色谱柱可以在100％水相中稳定。--（摘自《实用色谱技术问答》一书修改稿