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《应用色谱技术问答》之液相色谱篇-作者-施超欧(恐龙)


  在什么情况下应采用湿法装柱？怎样装法？


答：填料颗粒小于20 mm要采用湿法装柱，因为颗粒质轻，单位质量表面能高，凝聚粒子多，用干法装柱无法填充紧密。
所谓湿法装柱是指填充前用溶剂把填料制成匀浆，利用小粒子在粘度较大的介质中一时不能沉降的性质配制匀浆。用高压使匀浆通过柱子是较为理想的填充方法。
不同的色谱工作者在具体的装柱方法上可能有所差别，但是基本原则应当是一致的，一般的湿法装柱步骤如下：
（1） 根据柱体积确定填料量，加上适量溶剂使填料量占溶剂和填料总体积的l0—15％。可以更换不同容积的匀浆罐以容纳适量的溶剂。对硅胶微粒，溶剂通常用三氯乙烯—乙醇(1:1)或二氧六环—四氯化碳(1:2)；而对反相Cl8键合硅胶，溶剂常用异辛烷—三氯甲烷(1:3)。
（2） 把一定量的填料和溶剂放到玻璃瓶中，把玻璃瓶置于超声波内处理10分钟，分散开凝聚粒子，并得到匀浆。
（3） 迅速将匀浆倒入匀浆罐中。
（4） 用恒压泵以40-80 MPa 的压力把匀浆压入色谱柱，在溶剂被顶替掉后，压力下降到平衡位置，在平衡位置保持5—10分钟。
（5） 使压力进一步下降，然后关泵，当溶剂流速为零时。可把柱子卸下，测试柱效。
如果没有装柱的专业设备，可以按如下方法试试：先找一个空不锈钢色谱柱，清洗干净后，下段封好（接口不封），倒入匀浆好的色谱填料，迅速封好上端，接到HPLC上，加压，如果上端有孔隙，补上填料，注意不能分层，高压冲洗30min，即可。全过程动作要快，匀浆溶液要选好，充分超声。如果柱头还有孔隙，按补柱的方法处理。该法填柱的缺点是柱效低，重复性差。